健脾调肠方抑制NF-kB通路防治溃疡性结肠炎免疫调节机制（点击下载公示信息表）.pdf

公示材料 一、项目名称：健脾调肠方抑制 NF-kB 通路防治溃疡性结肠炎免疫调节机制 二、项目主要完成人：杜晓泉、张红、李舒、樊振、王延秋、贾雪燕 三、提名者： 陕西省中医药管理局 四、提名意见： 溃疡性结肠炎是以直肠黏膜连续性、弥漫性炎症改变为特点的慢性非特异性肠道炎症性疾病。以腹泻、黏液脓血便、腹痛为主要 表现，具有病程长、反复发作的慢性病程特征，进展中可转化为癌。至今本病病因不明，发病机制不清，治疗困难，选药叠加，疗效 不唯一。基于中医经典名方和临床实践，创“健脾调肠方”治疗溃疡性结肠炎，显示出中医药治疗溃疡性结肠炎的优势。在此基础上， 以 NF-kB 信号通路为角度，采用免疫组化和分子生物学技术，结合体内动物实验模型，从组织、细胞蛋白层面探讨了“健脾调肠方” 对溃疡性结肠炎的分子免疫作用机制。为中药治疗溃疡性结肠炎提供理论与实践基础。为临床提供中西医结合攻克溃疡性结肠炎复发 难点打下基础，为中国模式治疗溃疡性结肠炎奠定基础。 该成果研究有 3 个创新：①在中医原创理论基础上创新。以檗皮汤、参苓白术散为基础方，以中医病因学、病机学理论为基础， 得出溃疡性结肠炎的中医病机根本是脾虚为虚，湿热、瘀血为实，创“健脾调肠方”。②5%的 2,4,6—三硝基苯磺酸（TNBS）0.09ml 联合无水乙醇 0.06ml 灌肠复制大鼠溃疡性结肠炎模型，肠粘膜组织中有 NF-kB 通路变化。③健脾调肠方对溃疡性结肠炎的治疗作用及 对溃疡性结肠炎 NF-kB 表达的影响。 推荐材料齐全、规范，经完成单位公示，无知识产权纠纷，人员排序无争议，符合陕西省科学技术奖推荐条件，同意提名该项目 为陕西省科学技术进步奖三等奖。 五、项目简介： 溃疡性结肠炎是呈反复发作的慢性病程，虽然表现为腹泻、粘液脓血便、腹痛，或伴有里急后重，但它不同于细菌性痢疾。临床 分为初发型、慢性复发型。至今溃疡性结肠炎的病因不明，发病机理认为是肠道免疫功能紊乱，但引起肠道免疫功能紊乱的内在因果 关系不清，疾病的自然发展有出现肠穿孔、中毒性巨结肠、下消化道出血、癌变的并发症的可能。还有肠外表现，如虹膜炎、皮肤出 现结节性红斑、硬化性胆管炎等。复杂的发病机理、多种的伴随症及并发症，困扰患者，至今还不能彻底治愈本病。当前难点问题是： 从理论研究的可行方法，在实施中疗效不甚满意。而且难治性溃疡性结肠炎也有发生。一旦患有溃疡性结肠炎，反复发作，终身服药。 因此溃疡性结肠炎成为消化道疾病研究新热点。 此病的首例报道是在 1875 年发生在欧洲。近 15 年中国病例数 143511 例。据中国 23 所医院临床统计表明，在近 14 年里溃疡性 结肠炎的住院病人及内窥镜检查人数也一直在稳定增长。从这些结果来看，推测中国患病率为 11.6/10 万。在日本、韩国、沙特此病 也显示处上升趋势[1]。男女均有患病，有向青少年发展趋势。 目前中西医关于溃疡性结肠炎治疗目标是诱导缓解，消除症状、肠道炎症，促进粘膜愈合；维持缓解防止疾病复发；改善生存质 量；防止并发症。西医常用药物是氨基水杨酸制剂、激素、免疫抑制剂、生物制剂。用药是递阶式的，有些病例用药后，仍有手术的 可能。中医治疗目标和西医相同，但西药的副作用，以及昂贵的药价，从中医药中寻找更有效的药物治疗以及防止复发的探索是迫切 任务。大量临床和基础研究显示，中医中药有其独特优势，指导治疗溃疡性结肠炎取得良好的效果。 中医通过整体观念，辨证施治、调节气血，在防治溃疡性结肠炎中具有较大的优势，对调整人体免疫功能，控制症状方面具有良 好的临床疗效，并少有毒副作用。在前期的临床研究中，根据中医经典名方，结合中医病机认识，创中药“健脾调肠方”，在治疗溃 疡性结肠炎有较明显的疗效，尤其在轻度、中度型。在预防溃疡性结肠炎复发上有一定优势。因此本课题意在探讨健脾调肠方，通过 NF-kB 信号通路对细胞因子的免疫调节作用机制，从而为健脾调肠方防治溃疡性结肠炎提供依据，为中药治疗溃疡性结肠炎的标准化 奠定基础。 本项目研究得出：①健脾调肠方能抑制 NF-kB 信号通路的激活从而对溃疡性结肠炎产生治疗作用，且高剂量的治疗效果优于低剂 量和中剂量。揭示了具有健脾、清热、补血功效的健脾调肠方煎剂对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用。研究结果表明 NF-kB 信号通路可 能参与溃疡性结肠炎的发生发展过程，中药健脾调肠方可通过抑制 NF-kB 表达相关蛋白的影响，抑制免疫细胞的激活，从而消除肠道 黏膜的炎症反应，促进黏膜的愈合。为中医药防治溃疡性结肠炎提供了理论基础。②采用 5%TNBS 结合乙醇造 UC 大鼠模型的最佳配置 比例为：5%TNBS 0.09ml 和无水乙醇 0.06ml。这种比例造出的溃疡性结肠炎模型不仅有黑便、腹泻、精神倦怠等溃疡性结肠炎的症状， 而且死亡率小，病理组织切片也符合溃疡性结肠炎的表现，值得推广。 六、客观评价： 本成果属社会公益项目 1.健脾调肠方组方是基于中医经典名方，有中医理论基础，体现中医继承精华。 基于《肘后方》檗皮汤（黄柏、栀子、黄连、阿胶），《太平圣惠方》阿胶丸（阿胶、地榆、诃黎勒、熟干地黄、干姜、赤芍药、 黄连、白术、艾叶、枳壳、木香、当归），《太平惠民和剂局方》参苓白术散。在两晋至隋唐时期，以及宋金时期，这些方子是治疗 脓血便的代表性方药。从方子中可以看出，在出现脓血便的症状表现中，中医病机是湿热、阴血亏虚。治法是清热祛湿，养血调肠。 健脾调肠方吸取上述经典名方中阿胶的养血功能。 2.健脾调肠方组方是结合中医对溃疡性结肠炎病机的新认识，体现中医守正创新。 2010 年中华中医药学会脾胃病分会发表的溃疡性结肠炎中医诊疗共识、2010 年中国中西医结合学会消化系统疾病委员会发表的 溃疡性结肠炎中西医结合诊疗共识，2017 年中华中医药学会脾胃病分会发表的溃疡性结肠炎中医诊疗共识。共识认为病因多因外感时 邪，饮食不节，情志内伤，素体脾肾不足所致，湿热蕴肠，气滞络瘀为基本病机，脾虚失健为主要发病基础。脓血便的主要病机是湿 热蕴肠，脂膜血络受伤。以泄泻为主，实证为湿热蕴肠，大肠传导失司，虚证为脾虚湿盛，运化失常。以便血为主，实证为湿热蕴肠 能够，损伤肠络，络损血溢，虚为湿热伤阴，虚火内炽，灼伤肠络。瘀热阻络，迫血妄行。根据理论研究共识，全方主要组成党参、 白术、炒薏苡仁、陈皮、厚朴、阿胶、败酱草等，在活动期以脓血便，甚则血便为主时，方中败酱草、阿胶、炒薏苡仁为君药清热利 湿，理气止痛，养血活络。在大便次数多，大便不成形，无粘液，见少量血液，党参、白术、炒薏苡仁、陈皮等健脾理气化湿。 3.研究进一步探讨了健脾调肠方主要成分对溃疡性结肠炎的作用机制 动物实验模型的成功，是保证药物研究真实可信的基础。造模的成功具有与临床症状相似，操作简单，重复性好的特征。经过 收集有关大鼠溃疡性结肠炎造模资料、有关 NF—kB、溃疡性结肠炎的个案、临床研究、中药治疗溃疡性结肠炎的博士论文、硕士论文、 期刊杂志约 200 余篇的文献。化学诱导的结肠炎模型包括三硝基苯磺酸（TNBS）等作为半抗原，与组织中的大分子物质结合，形成完 全抗原，引起肠壁一系列免疫应答和炎症反应，造成肠黏膜损伤。该方法制作简单，周期短，重复性好的特点，但是试剂的浓度、使 用的剂量，以及作用的时间需要在实验中反复摸索。本课题经过不同剂量比例得出 5%TNBS 结合乙醇造 UC 大鼠模型的最佳配置比例为： 5%TNBS 0.09ml 和无水乙醇 0.06ml。这种比例造出的溃疡性结肠炎模型不仅有黑便、腹泻、精神倦怠等溃疡性结肠炎的症状，而且死 亡率小，病理组织切片也符合溃疡性结肠炎的表现。因此，此种比例为最佳的溃疡性结肠炎大鼠造模比例。 项目采用采用细胞培养、免疫组化、流式细胞仪和分子生物学技术，结合体内动物实验模型，从组织、细胞、蛋白几个层面系 列的探讨了，研究发现，①健脾调肠方治疗后脓血便逐渐减少，毛发逐渐恢复光泽。健脾调肠方高剂量组上述症状改善明显优于中剂 量组和低剂量组。②模型组可见结肠组织结构破坏，绒毛不同程度消失，黏膜和黏膜下层炎性细胞浸润，出现不同程度的充血、水肿、 糜烂及溃疡，健脾调肠方治疗组较模型组炎性细胞减少，溃疡面减轻或愈合，黏膜及黏膜下组织修复。③模型组可见广泛溃疡形成， 黏膜和黏膜下层中大量炎性细胞浸润，表达 NF-kB 的阳性细胞数量增加，经治疗后，给药组表达 NF-kB 的阳性细胞数量明显少于模型 组，高、中、低治疗组之间存在剂量依赖性，用药剂量越大表达 NF-kB 的阳性细胞越少。④结肠组织 NF-kB mRNA 的表达变化 模型 组结肠 NF-kB mRNA 表达明显高于空白组(P<0.01 )；健脾调肠方各治疗组结肠组织 NF-kB mRNA 表达较模型组明显降低 (P<0.05)，健 脾调肠方各治疗组之间有显著差异，剂量越高，NF-kB mRNA 表达越低，表明健脾调肠方的用药剂量与治疗效果有一定关系，剂量越高 治疗效果越好。 具有健脾、清热、补血功效的健脾调肠方煎剂对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用，研究结果提示 NF-kB 信号通路可能参与溃疡性 结肠炎的发生发展过程，中药健脾调肠方可通过抑制 NF-kB 表达对 UC 发挥预防和治疗作用，且治疗效果存在剂量依赖性。 4. 健脾调肠方的研究取得系列研究成果，具有明确而显著的临床应用价值。 本研究在国内学术期刊发表相关论文 20 余篇，核心期刊 20 篇，CSCD 1 篇。20 篇主要论文共被他引 179 次，研究工作得到了 国内同行的认可，在国内具有较高显示度。在此研究成果的基础上承担了 2015 年陕西省 10 个重大疾病创新项目—溃疡性结肠炎，进 行了成果推广，以及规范化研究。中标 2019 年陕西省科技厅项目和 2017 年陕西省中医药管理局课题各 1 项。已培养硕士研究生 13 名。 杜晓泉 201 8 年获陕西省名中医称号，依托杜晓泉名中医工作室，培养中青年师承医生 3 人。健脾调肠方在临床使用近 18 年，应用于 溃疡性结肠炎轻中度型，能够改善症状，减少复发，提高机体免疫力，能够做到服中药时，减少甚至不用西药美莎拉嗪。这在提高患 者生活质量及健康水平等方面发挥了积极的作用，在产生较好的经济效益的同时带来了明显社会效益。 七、应用情况： 健脾调肠方是基于中医经典名方，结合中医对溃疡性结肠炎中医病机认识，创新研究的中药汤剂，用于溃疡性结肠炎的治疗，是 陕西中医药大学附属医院消化科治疗溃疡性结肠炎的协定方，方子起到以下方面作用：①缓解病情，促进粘膜愈合，提高粘膜愈合质 量。②有效预防病情复发，提高患者生存质量。③改善激素依赖、免疫抑制药物抵抗患者病情。④在中西医治疗中，减轻西药的毒副 作用。以健脾调肠方为主方辨证施治于轻、中度溃疡性结肠炎，不用西药，甚至对于长期服用美沙拉嗪患者，在服用健脾调肠方后， 可以减量直到停服美沙拉嗪。而中药不需长期服药。在重度溃疡性结肠炎患者，与西药结合，能够缩短住院日。在西安中医医院、宝 鸡中医医院、安康中医医院、武功人民医院推广应用。 健脾调肠方一付价钱是 20.2 元 ，一周价钱是 约 142 元 。治疗溃疡性结肠炎必用西药美莎拉嗪肠溶片 0.5，每盒 40 片，价钱 229 元-536 元。1 盒是 5 天治疗量。美莎拉嗪肛栓，每盒 30 粒，每天 1 次，1 个月量，每盒 586 元。在缓解期美莎拉嗪口服药 1 盒 10 天维持量。按一周算，西药费用 229 或 536 元，中药是 147 元。若在配合美沙拉嗪肛栓，1 周费用 136.7 元，1 月费用 687 元-1608 元。 由于终生服药美莎拉嗪片，对于年轻患者，费用可高达上万。住院的溃疡性结肠炎患者，大多是重度溃疡性结肠炎，在中药参与下的 中西医结合治疗，使得总住院费用下降 200 元左右，平均住院天数缩短 2.3 天，中药治疗溃疡性结肠炎提高了患者满意度，改善了患 者生活质量，具有较好的社会效益。总费用的下降，住院天数的缩短，节约了卫生成本，从而创造了卫生经济效益。 八、主要知识产权和标准规范等目录（限 10 条）（科学技术进步奖、技术发明奖、创新驱动秦创原奖填写） 序号 知识产权类别 1 2 论文 论文 3 论文 知识产权 具体名称 健脾调肠方对溃疡性 结肠炎大鼠 NF-kB 表 达影响的实验研究 杜晓泉运用健脾调肠 汤治疗溃疡性结肠炎 脾虚湿热证经验总结 大鼠溃疡性结肠炎中 医证候动物模型研究 进展 国家 (地区) 中国 中国 中国 授权号 授权日 期 DOI:CN KI:SUN: SCZY.0. 2017-04029. 2017-0 4-15 四川中医 DOI:10. 3969/j.is sn.10007369.20 20.12.03 2. 2020-1 2-05 陕西中医 DOI:CN KI:SUN: AHZY.0. 2020-02025. 2020-0 安徽中医药大 4-01 学学报 证书编号 权利人 发明人 陕西中医药大学附属医 杜晓泉,张红,刘力. 院 陕西中医药大学 陕西中医药大学 袁子云,杜晓泉 刘金响,史英,刘海 涛,袁敏惠,杜晓泉 4 5 6 论文 论文 论文 5%TNBS 与 乙醇 不 同 剂量配伍优化大鼠 UC 模型的探索 475 例溃疡性结肠炎 患者临床特点与中医 辨证及用药规律研究 杜晓泉运用湿热伏邪 理论辨治溃疡性结肠 炎临床经验 中国 中国 中国 DOI： 10.3969/ j.issn.10 00-7369. 2016.07. 081. 2016-0705 陕西中医 DOI:10. 19664/j. cnki.100 2-2392.1 90019. 2019-0 1-14 中医药学报 樊振,李瑞,杜晓泉, 陕西中医药大学附属医 袁敏慧. 院 江苏中医药 郭星,田云,王延秋, 杜晓泉 DOI:10. 19844/j 2020-0 .cnki.1 8-05 672-397 X.2020. 08.009. 陕西中医药大学 陕西中医药大学 贾雪燕,李舒,张红,杜晓 泉 7 8 9 论文 论文 论文 溃疡性结肠炎肠道微 生物的研究进展 从血瘀角度浅谈血竭 治疗慢性非特异性溃 疡性结肠炎经验 脾虚类溃疡性结肠炎 动物模型研究进展 中国 中国 中国 DOI:10 .3877/ cma.j. issn.1 674-07 85.201 5.04.0 35 中华临床 2015-02 医 师 杂 志 陕西中医药大学 -15 (电子版) DOI:10. 3969/j.is sn.10022619.20 17.09.03 0. 2017-0 9-28 DOI:10 .3969/ j.issn .16737202.2 021.21 .025. 2021-0 6-06 李舒,刘文奇,傅鹂 河北中医 世界中医药 陕西中医药大学 陕西中医药大学 婕,许小凡,张红,杨 晓航. 王芮,杜晓泉 呼菁玉,杜晓泉,刘金 响,代蕊,刘力艳 10 论文 肠宁方并中药灌肠治疗 慢性复发型轻中度溃疡 性结肠炎临床研究 中国 DOI:10 ．13424 /j．cnki ．jsctcm ．2018 ．06．017 2018-1 1-20 陕 西 中 医 药 陕 西 中 医药 大 学 附 属 樊振,李瑞,袁敏惠,杜晓 大学学报 医院 泉. . 九、主要完成人情况： 姓名 行政 职务 排名 技术 职称 主任医师 杜晓泉 第一 科主任 张红 第二 主任 李舒 第三 樊振 第四 无 王延秋 第五 无 无 教授 工作单位 陕西中医药大学附 属医院消化二科 陕西中医药大学医 学科研中心 临 床 医 学 广州市妇幼医疗中 检验技师 心 主任医师 陕西中医药大学附 属医院 住院医师 陕西中医药大学附 完成单位 陕西中医药大学 陕西中医药大学 陕西中医药大学 陕西中医药大学 陕西中医药大学 对本项目（学术性/技术创造 性） 贡献 设计了项目总体方案，承担方案的 实施，总结结果，分析数据，发表 论文，共同立项，申报成果。 研究方案的设计和监查 ，合著发 表论文。 实验研究方案的实施，发表论文。 临床与实验研究方案的实施，发表 论文。 临床与实验研究方案实施，。发表 属医院 贾雪燕 第六 主治医师 无 陕西中医药大学附 属医院 论文。 陕西中医药大学 临床与实验研究方案实施，发表论 文。 完成人合作关系说明： 十、主要完成单位(学术性/创新推广)贡献 排 名 1 2 完成单位 陕西中医药大学 陕西中医药大学附 属医院 单位 性质 高等 院校 事业 单位 法定代表 人 联系人/电话 通讯地址 邮政编 码 孙振霖 陕西省咸阳市秦都 王晶 区世纪大道陕西中 029-38185000 医药大学 712000 李哲 陕西省咸阳市秦都 周锋 区渭阳西路付 2 号 029-33320868 陕西中医药大学附 属医院 712000 对本项目主要贡献 在项目研究初期积极 提供本课题申 报、调研、成果发表费用，并为获资 助课题提供配套经费。项目研究过程 中，提供了充分的人力、财力、物力 和研究场地等研究所需条件，协调， 组织和管理研究工作实施过程中出现 的问题，确保研究工作顺利进行。 项目研究过程中，提供了充分的人力、 财力、物力和研究场地等研究所需条 件，协调，组织和管理研究工作实施 过程中出现的问题，确保研究工作顺 利进行。 十一、完成人合作关系说明 序号 合作方式 合作者/项目排名 合作起始和完成时间 张红/第二完成人 1 2 论文合著 论文合著 3 论文合著 4 论文合著 5 论文合著 2013.06.01-2019.12.31 李舒/第三完成人 樊振/第四完成人 王延秋/第五完成 人 贾雪燕/第六完成 人 合作成果 合著论文：①健脾调肠方对溃疡性结肠炎大鼠 NF-kB 表达影 响的实验研究④5%TNBS 与乙醇不同剂量配伍优化大鼠 UC 模 型的探索 发表论文：⑦溃疡性结肠炎肠道微生物的研究进展 2013.06.01-2019.12.31 合作论文：④5%TNBS 与乙醇不同剂量配伍优化大鼠 UC 模型 的探索 发表论文：⑤475 例溃疡性结肠炎患者临床特点与中医辨证 2013.06.01-2020.12.31 及用药规律研究 ⑩肠宁方并中药灌肠治疗慢性复发型轻中度溃疡性结肠炎临床研究 合作论文：⑥杜晓泉运用湿热伏邪理论辨治溃疡性结肠炎临 2019.01.01—2020.12.31 床经验 2014.01.01-2020.12.31 发表论文：④5%TNBS 与乙醇不同剂量配伍优化大鼠 UC 模型 的探索