阿魏酸通过调控缺氧诱导因子导PC12细胞损伤的保护作用研究.pdf

中国临床药理学杂志 2584 第 35 卷 第 20 期 2019 年 10 月（ 总第 298 期） 阿魏酸通过调控缺氧诱导因子 － 1 α 对氧糖 剥夺诱导 PC12 细胞损伤的保护作用研究 Protective effect of ferulic acid on PC12 cell injury induced by oxygen deprivation induced by regulation hypoxia － inducible factor － 1 α 1 2 2 张男男 ，徐士欣 ，张军平 ， 1 1 1 曹澜澜 ，崔亚男 ，刘亚鹭 摘要： 目的 研究阿魏酸（ FA） 通过调控缺氧诱导因子 － 1α （ HIF － 1α） 对氧糖 剥夺（ OGD） 诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（ PC12） 细胞损伤的保护作用。方法 （ 1） 将 PC12 细胞分为 3 组： 正常组、模型组和实验组。正常组细胞不做任何处 理，模型组用混合气体方法（ 94% N2 + 5% CO2 + 1% O2 ） 建立 OGD 模型，实验 －1 ） 的阿魏 （ 1. 天津 中 医 药 大 学 研 究 生 院，天 津 300193； 5. 0， 10， 20， 40， 80 μmol·L 组于 OGD 损伤的同时给予不同浓度（ 2. 5， 2. 天津中医药大学 第一附属医院 中心实验室， 酸，于 OGD 12 h 后收集细胞。通过 MTS 法检测细胞活力，筛选出 FA 低、中、高 3 天津 300193） 10， 20 μmol·L 个浓度组（ 5， －1 ） 。（ 2） 构建 HIF － 1α 过表达质粒，用脂质体转染 技术，将细胞实验分为 4 组： 对照组、模型组、FA 中浓度组、HIF － 1α 过表达 + FA 中浓度组。用 MTS 法检测转染 HIF － 1α 过表达质粒后细胞活力变化，以免 1 2 ZHANG Nan － nan ，XU Shi － xin ， 2 1 ZHANG Jun － ping ，CAO Lan － lan ， 1 CUI Ya － nan ，LIU Ya － lu 1 疫印迹法检测 HIF － 1α、BNIP3（ 隶属于 Bcl － 2 蛋白超家族） 蛋白水平表达变化。 结果 （ 1） 正常组、模型组和 6 个浓度（ 由低至高） 实验组的细胞存活率分别为 （ 100. 00 ± 4. 67） % ，（ 63. 30 ± 8. 35 ） % ，（ 67. 38 ± 6. 63 ） % ，（ 74. 77 ± 7. 61 ） % ， （ 81. 50 ± 7. 33） % ，（ 85. 40 ± 5. 62） % ，（ 66. 12 ± 3. 62） % 和（ 52. 38 ± 3. 82） % ； 模 型组与 正 常 组 比、或 者 实 验 组 与 模 型 组 相 比，差 异 均 有 统 计 学 意 义 （ 均 （ 1． Graduate School，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine （ TCM） ， Tianjin 300193，China； 2． Central Labo- P ＜ 0. 01） 。（ 2） 对照组、模型组、FA 中浓度组、HIF － 1α 过表达 + FA 中浓度组的 细胞存活率分别为（ 100. 00 ± 5. 91） % ，（ 68. 03 ± 4. 18） % ，（ 77. 13 ± 6. 12） % 和 （ 56. 58 ± 5. 71） % ； 对照组与模型组比、或者 FA 中浓度组与模型组相比，差异均 有统计学意义（ 均 P ＜ 0. 05） ； HIF － 1α 过表达 + FA 中浓度组与 FA 中浓度组相 ratory，The First Teaching Hospital of 比，差 异 有 统 计 学 意 义 （ P ＜ 0. 05 ） ； 这 4 组 的 HIF － 1α 相 对 表 达 量 分 别 为 Tianjin University of TCM， Tianjin 1. 00 ± 0. 12， 1. 57 ± 0. 12， 1. 24 ± 0. 19 和 1. 62 ± 0. 11； 这 4 组的 BNIP3 蛋白相对 300193，China） 4. 39 ± 0. 69， 1. 59 ± 0. 31 和 2. 33 ± 0. 31； 对照组与模 表达量分别为 1. 00 ± 0. 22， 型组相比、或者 FA 中浓度组与模型组比，HIF － 1α 和 BNIP3 蛋白水平均明显降 低，差异均有统计学意义（ 均 P ＜ 0. 05） ； HIF － 1α 过表达 + FA 中浓度组与 FA 中 浓度 组 相 比，HIF － 1α 蛋 白 水 平 升 高，差 异 有 统 计 学 意 义 （ P ＜ 0. 05 ） 。 结论 HIF － 1α过表达可引起细胞损伤，FA 可保护 OGD 诱导 PC12 细胞损伤， 其作用机制是通过抑制 HIF － 1α / BNIP3 途径实现的。 关键词： 缺氧诱导因子 － 1α； 阿魏酸； 氧糖剥夺； 细胞损伤 DOI： 10. 13699 / j. cnki. 1001 － 6821. 2019. 20. 015 中图分类号： R28 收稿日期： 2019 － 05 － 07 定稿日期： 2019 － 07 － 09 基金 项 目： 国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 （ 81774059； 81373850） 文献标志码： A 文章编号： 1001 － 6821（ 2019） 20 － 2584 － 05 Abstract： Objective To investigate the protective effect of ferulic acid 作者简介： 张男男（ 1991 － ） ，女，硕士，医师，主 （ FA） on oxygen － glucose deprivation（ OGD） induced injury of rat adre- 要从事中医 药防治 心脑 血 管疾 病方 nal pheochromocytoma （ PC12） cells by regulating hypoxia inducible fac- 向研究 tor － 1 α （ HIF － 1 α ） . Methods 通信作者： 徐士欣，副教授，硕士生导师 MP： （ 022） 29787795 E － mail： xushixint@ 163. com （ 1） PC12 cells were divided into three groups： normal group，model group and experimental group. The normal group did not do any treatment. The model group used the mixed gas Chin J Clin Pharmacol 2585 Vol. 35 No. 20 October 2019（ Serial No. 298） method （ 94% N2 + 5% CO2 + 1% O2 ） to establish the OGD model. The experimental group was given different concentrations （ 2. 5，5. 0，10，20，40，80 μmol·L － 1 ） of FA at the same time as OGD injury，cells were collected after OGD for 12 h. The cell viability was detected by MTS method，and the low，medium and high concentration groups（ 5， 10， 20 μmol·L － 1 ） of FA were screened out. （ 2） Construction of HIF － 1 α over expression plasmid，using lipofection technology，the experiment was divided into 4 groups： normal group，model group，FA concentration － M group， HIF － 1 α over expression + FA concentration － M group. The cell viability of HIF － 1 α over expressing plasmid was detected by MTS assay，and the expression of HIF － 1 α and BNIP3（ belonging to Bcl － 2 protein superfamil） protein was detected by immunoblotting. Results （ 1） The cell viability of normal group，model group and six concentrations experi- mental groups were （ 100. 00 ± 4. 67 ） % ， （ 63. 30 ± 8. 35 ） % ， （ 67. 38 ± 6. 63 ） % ， （ 74. 77 ± 7. 61 ） % ， （ 81. 50 ± 7. 33） % ，（ 85. 40 ± 5. 62 ） % ，（ 66. 12 ± 3. 62 ） % ，and （ 52. 38 ± 3. 82 ） % ； comparing between model group and control group or experimental groups and model group，the difference was significant （ all P ＜ 0. 01） . （ 2） The survival rates of control group，model group，FA concentration － M group，HIF － 1 α over expression + FA concentration － M group were （ 100. 00 ± 5. 91 ） % ，（ 68. 03 ± 4. 18 ） % ，（ 77. 13 ± 6. 12 ） % ，and （ 56. 58 ± 5. 71 ） % ； comparing between control group and model group or FA concentration － M group and model group，the difference was significant （ P ＜ 0. 05） ； comparing between HIF － 1 α over expression + FA concentration － M group and FA concentration － M group，the difference was significant （ all P ＜ 0. 05） . The relative expression levels of HIF － 1 α in these four groups were 1. 00 ± 0. 12，1. 57 ± 0. 12，1. 24 ± 0. 19，and 1. 62 ± 0. 11. The relative expression levels of BNIP3 protein were 1. 00 ± 0. 22，4. 39 ± 0. 69，1. 59 ± 0. 31，and 2. 33 ± 0. 31. Comparing between control group and model group or FA concentration － M group and model group，the levels of HIF － 1 α and BNIP3 were lower，the difference was significant （ P ＜ 0. 05 ） ． Comparing between HIF － 1 α over expression + FA concentration － M group and FA concentration － M group， HIF － 1 α protein level was increased， the difference was significant （ P ＜ 0. 05 ） . Conclusion Over expression of HIF － 1 α can cause cell damage，and FA can protect PC12 cells from injury induced by OGD. The mechanism of action is through inhibition of HIF － 1 α / BNIP3 pathway． Key words： hypoxia inducible factor － 1 α ； ferulic acid； oxygen － glucose deprivation； cell injury 阿魏酸 （ FA） 是阿魏、当归、川芎和升麻等中药的 ［1］ 主要酚酸类有效成 分 之 一 ［2］ 应 。FA 具 有 减 轻 炎 症 反 小鼠 IgG、定量 PCR 试剂盒，均由武汉博士德生物有 限公司生产。 、削弱细胞凋亡［3］ 等作用。缺氧诱导因子 （ HIF） 仪器 倒 置 相 差 显 微 镜，日 本 Olympus 公 司 产 用的监管体系，成为治疗缺血缺氧性疾病的关键目标 品； 全自动多功能酶标仪，德国 Thermo 公司产品； 实 时荧光 定 量 PCR （ RT － PCR ） 仪，瑞 士 Roche 公 司 因子。 BNIP3 隶 属 于 Bcl － 2 蛋 白 超 家 族，属 于 产品。 “BH3 － only”促凋亡蛋白。 本实验探讨 FA 对氧糖剥 2 夺（ OGD） 损伤 PC12 细胞的保护作用，并观察其是否 2. 1 转录系统已成为一个对局部或全身氧含量起重要作 实验方法 分组与处置 将细胞分为 8 组： 正常组、模型组和 6 个浓度实 对 HIF － 1 α / BNIP3 起调节作用。 验组。 材料与方法 1 DMEM 无糖 培 养 液； 实 验 组 更 换 为 终 浓 度 为 （ 2. 5， 材料 细胞株 正常组的 PC12 细胞生长 24 h 后，更换 DMEM 高 糖培养液，置于培养箱中继续 培 养。 模 型 组 更 换 为 PC12 大 鼠 肾 上 腺 嗜 铬 细 胞 瘤 细 胞 株 （ 高分化） ，购于武汉博士德生物科技有限公司 。 药物 及 试 剂 阿 魏 酸，含 量： 98% ，批 号： 5. 0， 10， 20， 40， 80 μmol·L － 1 ） 的 FA 溶液。除了正常 组以外，将细胞置于三气培养箱 （ 94% N2 + 5% CO2 + 1% O2 ） 中，建立 OGD12 h 体外模型，每个浓度设置 6 20160929，北京 Solarbio 公司生产。MTS 细胞增殖试 个复孔。 剂盒，美 国 Promega 公 司 生 产； 缺 氧 诱 导 因 子 － 1 α 2. 2 （ HIF － 1 α ） 抗体，联科生物有限公司生产； HRP 羊抗 ［4］ 以 MTS 法筛选低、中、高 3 个浓度 FA 按照文献方法操作。 按照试剂盒说明书检测细 中国临床药理学杂志 2586 第 35 卷 第 20 期 2019 年 10 月（ 总第 298 期） 胞活力。每孔加入 MTS 溶液 20 μL，继续培养 2 h，用 多功 能 酶 标 读 板 仪 检 测 各 孔 490 nm 处 的 光 密 度 20 μmol·L － 1 ） FA 进行实验。结果见表 1。 （ OD） 值，并对细胞活力进行统计。 表1 阿魏酸（ FA） 不同浓度对氧糖剥夺（ OGD） 损伤 PC12 细 主要检测指标 胞活力的影响（ x珋± s） 分组 构建 HIF － 1 α 过表达质粒，用脂质体转染技术， Table 1 2. 3 2. 3. 1 将细胞实验分为 4 组： 正常组、模型组、FA 中浓度组 和 HIF － 1 α 过表达 + FA 中浓度组。 Effects of different concentrations of ferulic acid（ FA） on the viability of PC12 cells injured by oxygen － glucose deprivation （ OGD； x珋± s） Concentration Group （ μmol·L － 1 ） 以免疫印迹法检测 HIF － 1 α 和 BNIP3 蛋白 2. 3. 2 ［5］ n Cell viability （ %） 变化 Control 0 6 100. 00 ± 4. 67 分组 、培 养 、造 模 同 2. 3. 1 。 按 照 文 献 方 法 操 作 。 造模结束后 ，提取细胞总蛋 白 ，SDS － PAGE 考 Model 0 6 63. 30 ± 8. 35 ＊＊ Experimental － A 2. 5 6 67. 38 ± 6. 63 马斯亮蓝染色观察蛋白电泳 ，电泳仪将蛋白质转移 至 PVDF 膜 上 。 分 别 加 入 相 应 的 一 抗 和 二 抗 。 化 Experimental － B 5. 0 6 74. 77 ± 7. 61 ## Experimental － C 10. 0 6 81. 50 ± 7. 33 ## Experimental － D 20. 0 6 85. 40 ± 5. 62 ## Experimental － E 40. 0 6 66. 12 ± 3. 62 Experimental － F 80. 0 6 52. 38 ± 3. 82 ## 学发光检测系 统 显 影 ，拍 照 。 用 ImagJ 对 WB 条 带 进行密度 分 析 ，计 算 目 的 条 带 与 β － Actin 内 参 条 带的光密度比值 。 2. 3. 3 以时 RT － PCR 检测 BNIP3 mRNA 表达［5］ 分组、培养、造模同 2. 3. 1。 按照文献方法操作。 收集各组细胞，Trizol 提取细胞总 RNA。 引物由美国 GeneCopoeia 公司合成。逆转录合成 cDNA 为模板，以 时定量 RT － PCR 检测 BNIP3 mRNA 的表达，计算目 的基因相对表达量。 2. 4 次要检测指标———荧光显微镜下经 DAPI 染色 ［6］ 观察细胞形态变化 分组： 将细胞实验分为 5 组： 正常 组、模 型 组 和 低、中、高 3 个浓度实验组按照文献方法操作 。 给药干预结束后，每孔加终浓度为 100 ng·mL －1 的 DAPI 染液对细胞进行染核，用甘油对细胞爬片进 行封片，置于荧光显微镜下，随机取 6 个视野，200 倍 镜下观察并拍照分析。 3 统计学处理 Model： Oxygen － glucose deprivation； Experimental group： FA； Compared with control group，＊＊ P ＜ 0. 01； Compared with model，## P ＜ 0. 01 2 FA 抑制 HIF － 1 α 表达促进 OGD 损伤 PC12 细胞 的存活 模型组 与 正 常 组 比 较 ，细 胞 活 力 明 显 降 低 而 HIF － 1 α蛋白表达水平 明 显 提 高 ，差 异 均 有 统 计 学 意义 （ 均 P ＜ 0. 01 ） 。 FA 中 浓 度 组 与 模 型 组 比 较 ， 上述指 标 的 差 异 均 有 统 计 学 意 义 （ 均 P ＜ 0. 01 ） 。 HIF － 1 α + FA － M 与 FA 中 浓 度 组 比 较 ，上 述 指 标 的差异有统计学意 义 （ P ＜ 0. 05 ，P ＜ 0. 01 ） 。 表 明 HIF － 1 α 过 表 达 组 上 调 HIF － 1 α 的 表 达 ，提 示 FA 可抑制 HIF － 1 α 的 表 达 ，从 而 促 进 细 胞 存 活 。 结 果见表 2 。 表2 转染 HIF － 1α 后 FA 对 OGD 损伤细胞活力和缺氧诱导 用 SPSS17. 0 统计分析软件进行数据分析，计量 资料以 x珋± s 表示。组间比较采用单因素方差分析； 组 Table 2 间两两比较，用 SNK － q 检验。 the expression of hypoxia inducible factor － 1α（ HIF － 1α） protein 因子 － 1α （ HIF － 1α） 蛋白表达水平的影响（ x珋± s） Effect of FA on the viability of OGD － injured cells and after transfection of HIF － 1α（ x珋± s） 结 果 Cell viability HIF － 1α / total protein （ %） （ μg·mg － 1 ） 6 100. 00 ± 5. 91 1. 00 ± 0. 12 Model 6 68. 03 ± 4. 18 ＊＊ 1. 57 ± 0. 12 ＊＊ －1 μmol·L 内，随着药物浓度的增加，细胞活力也同时 FA － M 6 77. 13 ± 6. 12 # 1. 24 ± 0. 19 # 增加，差异均有统计学意义 （ 均 P ＜ 0. 01） ； 在 40 ～ 80 HIF － 1α + FA － M 6 56. 58 ± 5. 71 ＆＆ 1. 62 ± 0. 11 ＆ －1 μmol·L 内，细胞活力逐渐下降，差异均有统计学意 Compared with control group，＊＊ P ＜ 0. 01； Compared with model group， 10， 义（ 均 P ＜ 0. 01） 。 所以后续将选用 3 个浓度 （ 5， # 1 Group n 低、中、高 3 个浓度 FA 的筛选 Control 6 个 浓 度 实 验 组 与 模 型 组 比 较，在 5 ～ 20 P ＜ 0. 05； Compared with FA － M group，＆ P ＜ 0. 05，＆＆ P ＜ 0. 01 Chin J Clin Pharmacol 2587 Vol. 35 No. 20 October 2019（ Serial No. 298） FA 对 OGD 损伤细胞 BNIP3 （ 隶属于 Bcl － 2 蛋白超家 表3 族） mRNA 和 BNIP3 蛋白水平的影响（ x珋± s） Table 3 Effect of FA on BNIP3（ belonging to Bcl － 2 protein su- perfamil） mRNA and BNIP3 protein levels in OGD － injured cells （ x珋± s） BNIP3 mRNA BNIP3 / total protein fold change （ μg·mg － 1 ） Group n Control 6 1. 00 ± 0. 09 1. 00 ± 0. 22 Model 6 5. 63 ± 0. 48 ＊＊ 4. 39 ± 0. 69 ＊＊ FA － M 6 2. 08 ± 0. 51 ## 1. 59 ± 0. 31 ## HIF － 1α + FA － M 6 3. 68 ± 0. 70 ＆＆ 2. 33 ± 0. 31 Compared with control group，＊＊ P ＜ 0. 01； Compared with model group， ## P ＜ 0. 01； Compared with FA － M group，＆＆ P ＜ 0. 01 图1 3 FA 对 BNIP3 基因和蛋白表达的影响 模型组与正常组比较，HIF － 1 α 和 BNIP3 基因和 蛋白的表达水平均明显提高，差异均有统计学意义 （ 均 P ＜ 0. 01） 。HIF － 1 α 和 BNIP3 基因表达水平的 差异有统计学意义（ P ＜ 0. 01） 。结果见表 3。 4 DAPI 染色观察细胞核形态学变化 正常培养的 PC12 细胞形态完整 ，染色质均匀 ， 无明显凋亡发生 。OGD12 h 后 ，出现细胞凋亡进一 步加重 ，细胞核固缩 ，形成许多颗粒光斑 ，凋亡严重 的细胞核形成碎 片 ，细 胞 核 解 体 。 FA 组 也 有 部 分 细胞表 现 为 凋 亡 形 态 ，但 数 量 明 显 低 于 模 型 组 。 见图 1 。 荧光显微镜下各组细胞核形态学变化（ × 200） Figure 1 Morphological changes of cells in each group under fluorescence microscope （ × 200） 家族中促 凋 亡 蛋 白 ，其 成 员 BNIP3 、Noxa 和 Nix 启 讨 论 动子上均具 有 缺 氧 反 应 原 件 （ HRE ） ，受 HIF － 1 α 转录调控 ，可参 与 或 启 动 线 粒 体 凋 亡 信 号 通 路 ，激 在离体 培 养 的 大 鼠 神 经 元 经 缺 血 样 损 伤 后 ， 活 Caspase 级联反应 ，产生 活 化 的 caspase － 3 ，从 而 HIF － 1 α表达明显增加 ，过表达 HIF － 1 α 可导致细 诱导凋 亡 。 BH3 － only 蛋 白 在 脑 缺 血 性 损 伤 的 神 胞死亡 。 同样 ，缺 血 性 脑 损 伤 在 体 实 验 中 ，脑 组 织 经细胞凋亡过程中起重要作用 ［9］ 。 HIF － 1 α 表 达 上 调 ，加 入 HIF － 1 α 抑 制 剂 后 则 具 本实验结 果 显 示，阿 魏 酸 可 呈 浓 度 依 赖 性 提 高 有明显的 保 护 作 用 ，表 明 HIF － 1 α 可 能 参 与 了 神 OGD 损伤 PC12 细胞活性，改善细胞形态； 阿魏酸可 ［7］ 。 在缺血缺氧早期 ，HIF － 1 α 的表达诱导 降低 HIF － 1 α 表 达，同 时 细 胞 活 力 提 高，而 过 表 达 神经元凋亡 ； 而晚 期 HIF － 1 α 的 上 调 ，可 起 到 抑 制 HIF － 1 α 后，该保护效应消失，同时检测 HIF － 1 α 下 经损伤 ［8］ 神经元 凋 亡 的 作 用 。 BH3 － only 蛋 白 是 Bcl － 2 游促凋 亡 靶 基 因 BNIP3 基 因 和 蛋 白，发 现 模 型 组 中国临床药理学杂志 2588 第 35 卷 第 20 期 2019 年 10 月（ 总第 298 期） BNIP3 基 因 和 蛋 白 水 平 升 高，阿 魏 酸 可 显 著 降 低 BNIP3 的表达，而转染过表达 HIF － 1 α 后，BNIP3 基 因表达水平升高，因此推测，阿魏酸可通过调节 HIF － 1 α / BNIP3 途径，发挥保护细胞的作用。 tioxidant and anti － apoptotic mechanisms in vitro and in vivo［J］． Int J Mol Med， 2017， 40（ 5） ： 1444 － 1456． ［6］ CHEN B，NING J L，GU J T，et al． Caspase － 3 inhibition prevents the development of hepatopulmonary syndrome in common bile duct ligation rats by alleviating pulmonary injury［J］． Liver International， 2015， 35（ 4） ： 1373 － 1382． 参考文献： ［7］ SCHAIBLE E V，WINDSCHUGL J，BOBKIEWICZ W，et al． 2 － Me- ［1］ 胡益勇，徐晓玉 . 阿魏酸的化学和药理研究进展［J］． 中成药， thoxyestradiol confers neuroprotection and inhibits a maladaptive HIF － 1α response after traumatic brain injury in mice［J］． J Neurochem， 2006， 28（ 2） ： 253 － 255． ［2］ 孟锐，陈逸青，陈勤 . 阿魏酸对痴呆小鼠脑内胶质细胞活化与 炎性细胞 因 子 表 达 的 影 响［J］． 中 国 医 院 药 学 杂 志，2018，38 2014， 129（ 6） ： 940 － 954． ［8］ YEH S H，OU L C，GEAN P W，et al． Selective inhibition of early － but not late － expressed HIF － 1α is neuroprotective in rats （ 1） ： 50 － 53． ［3］ 邢玉凤，刘东海，张淑红，等． 阿魏酸对戊四氮致癫痫大鼠海马 组织中 Bax 和 Bcl － 2 蛋白表达的影响［J］． 中风与神经疾病杂 after focal ischemic brain damage［J］． Brain Pathol，2011， 21（ 3） ： 294 － 262． ［9］ ALTHAUS J，BERNAUDIN M，PETIT E，et al． Expression of 34（ 10） ： 919 － 921． 志，2017， ［4］ ZHANG L － C，JIN X，HUANG Z，et al． Protective effects of cho- the gene encoding the pro － apoptotic BNIP3 protein and stimu- line against hypoxia － induced injuries of vessels and endothelial cells lation of hypoxia － inducible factor － 1 α （ HIF － 1 α ） protein ［J］． Exp Ther Med， 2017， 13（ 5） ： 2316 － 2324． following focal cerebral ischemia in rats［J］． Neurochem Int， ［5］ REN Z，ZHANG R，LI Y，et al． Ferulic acid exerts neuroprotective 2006 ，48 （ 8 ） ： 687 － 695 ． （ 本文编辑 effects against cerebral ischemia / reperfusion － induced injury via an- 权菊香） （ 上接第 2583 页） 哮喘的临床疗效及其对外周血清白细胞介素 － 8 和肿瘤坏死因 讨 论 子 － α 的影响［J］． 世界中医药，2018，13（ 11） ： 67 － 72． ［2］ 朱迪娜，辛文锋，张文生 . 栀子苷治疗糖尿病及其并发症的分 子机制研究进展［J］． 环球中医药，2015，8（ 5） ： 624 － 628． 本研究中低、高剂量实验组小鼠 BLAF 中炎性因 子 IL － 4、IL － 5 含量及肺组织 Underwood 评分较模型 ［3］ 洪滔，贾菠，舒坤，等． 寒喘舒对支气管哮喘模型小鼠气道重建 组降低，TGF － β1 较模型组升高，且低、高剂量实验组 差异显著，提示栀子苷对支气管哮喘幼年小鼠气道炎 ［4］ 颜延凤，朱佳 . 定喘汤对哮喘模型小鼠肺组织炎性病变及 Th2 细胞 症反应也具有显著的抑制作用，抗炎效果显著，可有 ［8 － 9］ ，肺泡 效缓解其肺组织炎性病理损伤。 研究报道 巨噬细胞 TLR4 / MyD88 / NF － κB 通路在气道炎症反 应的形成与调控中具有重要意义。 本研究中模型组 肺组织 TLR4、MyD88、NF － κB 蛋白相对表达量均较 正常组升高而低、高剂量实验组较模型组降低，提示 栀子苷可通过抑制 TLR4 / MyD88 / NF － κB 信号通路 活化继而抑制支气管哮喘幼年小鼠气道炎性反应，缓 解其炎性病理损伤。 参考文献： ［1］ 孙雪松，王吉元，李树斌，等． 大柴胡汤治疗痰瘀互结型支气管 的影响［J］． 江西医药，2017，52（ 12） ： 1289 － 1291． 相关炎性因子的影响［J］． 江苏中医药，2019，51（ 1） ： 81 － 85． ［5］ 张世鑫，朱周靓，夏勇，等． 低浓度大气颗粒物短期暴露对小鼠 肺组织损伤效应研究［J］． 预防医学，2018，30（ 1） ： 26 － 30． ［6］ 黄玉强 . 雷公藤多甙对哮喘小鼠气道炎症及重塑影响的研究 ［D］． 青岛： 青岛大学，2007． ［7］ 雷升萍，王靓，龙子江，等． 黄精多糖通过 TLR4 － MyD88 － NF － κB 通路抑制缺氧 / 复氧 H9c2 心肌细胞炎性因子释放［J］． 中国 药理学通报，2017，33（ 2） ： 255 － 260． ［8］ SHIMOD T，OBASE Y，NAGASAKA Y，et al. 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