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Research Articles 基础研究 229 肾素血管紧张素系统基因多态性与低肾素性高血压的相 关性研究 张怡 初少莉 高平进 朱鼎良 【摘要】目的 研究肾素血管紧张素（RAS）系统 REN 基因 C-5312T、AGT 基因 A-20C 和 M235T、AGTR1 基因 A1166C、CYP11B2 基因 T-344C 5 种多态性与低肾素性高血压（LRH）的相关性。方法 采用 MALDI-TOF 质谱检测技术对 137 例 LRH 患者和 245 例正常肾素 高血压（NRH）患者进行 5 个基因多态性分型和相关性分析。结果 发现 LRH 组较 NRH 组收缩压、血钠、24 小时尿钠明显升高、血清高 密度脂蛋白显著下降、左室重量指数明显增高。CYP11B2 基因 -344C 等位基因频率在 LRH 组显著高于 NRH（0.36 vs 0.26，P=0.003） 。校 正年龄、性别、体重指数后，-344C 等位基因携带者 LRH 易感性增加（显性模式 ：OR=1.93, 95%CI 1.23-3.01，P=0.004） ，而其他基因多态 性基因型和等位基因频率在两组间均无显著差异（P 均 >0.05） 。CYP11B2 基因 C 等位基因携带者与 TT 基因型相比，有更低的血浆肾素活 性和尿醛固酮水平（P 均 <0.05）。结论 CYP11B2 基因 T-344C 多态与 LRH 的易感性相关。 【关键词】 高血压 基因 多态性 肾素血管紧张素系统 The Association Study for Renin Polymorphisms of Angiotensin Aldosterone System Genes and Low Renin Hypertension ZHANG Yi, CHU Shao-li, GAO Ping-jin, ZHU Ding-liang. State Key Laboratory of Medical Genomics and Shanghai Key Laboratory of Vascular Biology and Hypertension Department at Ruijin Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai Institute of Hypertension. Shanghai 2005, China 【Abstract】 Objective To assess the relationship between 5 polymorphisms, REN gene C-5312T、AGT gene A-20C and M235T、 level of sodium both in blood and urine, lower level of HDL and higher left ventricular mass index. The frequency of CYP11B2 the –344C allele was significantly higher in LRH group (0.36 vs 0.26，P=0.003）. The C allele showed the significantly increased risk after adjusting for age, sex and body mass index (dominant model: odds ratio[OR]1.93, 95%confidence interval[CI]1.23 to 3.01, P=0.004）. There was no significant difference for other two 4 polymorphisms between LRH and NRH groups (all P >0.05). The CYP11B2 -344C allele carriers had significant lower plasma renin activity and uric aldosterone level compared to T allele carriers (both P>0.05). Conclusion CYP11B2 T-344C is associated with increased susceptibility to LRH. 【Key words】 Hypertension;Gene;Polymorphism;Renin angiotensin system 基金资助项目 ：国家自然基金（30871361） 、上海市科委基金（08410701900, 08DZ2200400，09540704600） 、上海交通大学医学院优秀青年教 师基金 作者单位： 医学基因组学国家重点实验室，上海市血管生物学重点实验室，上海交通大学医学院附属瑞金医院高血压科，上海市高血压研究所， 上海 200025 通讯作者 ：朱鼎良 Email ：zhudingliang@sibs.ac.cn 中国分子心脏病学杂志 137 LRH and 245 normal renin hypertensives (NRH). Results It was observed that LRH was associated with higher systolic blood pressure，higher Volume 10 No.4 August 2010 AGTR1gene A1166C、CYP11B2 gene T-344C and low renin hypertension (LRH). Methods MALDI-TOF analyses were performed to genotype in 230 Research Articles 基础研究 高血压为遗传与环境因素共同作用所致的多基因复杂性疾病。基 Hotstar Taq 酶 0.03μl，DNA 模 板 (10 ng) 1μl ； 反 应 程 序 ：95 ℃ 因识别的基础在于表型。目前大多数研究仍然选择血压值或是否患高 15min ；95℃ 20sec，56℃ 30 sec，72℃ 1min，45 个循环 ；72℃ 3min ； 血压作为表型分型的指标，但血压的波动性、高血压定义的人为性， 4℃∞ 。PCR 产物经虾碱酶（SAP）纯化、延伸、树脂纯化后移至 384 尤其是高血压发病机制的多样性，使它们不能成为理想的表型指标。 孔 Spectro CHIP 芯 片，MassARRAYTM Analyzer 质 谱 检 测 后， 运 行 选择某一较为理想的中间表型对高血压患者进行表型分型，这是减少 MassARRAYTM Typer 3.0.1 软件进行数据分析。 研究对象异质性的一项可行的策略。 1.3 统计方法 采用 SPSS12.0 软件进行分析。正态分布的计量资 原发性高血压可以按照肾素的水平分为高肾素、正常肾素和低 料以均数 ± 标准差表示，均数组间比较采用独立样本 t 检验 ；对数正 肾素型三种临床类型，约 1/4-1/3 的原发性高血压患者表现为低肾素， 态分布的计量资料以均数，95% 可信区间（CI）表示，数据转化成对 我国原发性高血压患者更以低肾素型居多，低肾素性高血压（Low- 数后组间比较采用 t 检验。计数资料采用 χ2 检验。Hardy-Weinberg 平 renin hypertension, LRH）作为原发性高血压的一个亚型，已被广泛 衡检验、基因型和等位基因频率分析采用 χ2 检验。采用多元 Logistic 接受 [1]。LRH 主要与钠潴留及细胞外液容量过多有关，参与水盐代 回归模型校正年龄、性别及 BMI 的影响，以检测多态位点与 LRH 的 谢调节的肾素血管紧张素系统（RAS）相关的基因可作为 LRH 的候 关联是否独立。相对危险度以优势比（OR）和 95%CI 表示。所有统 选基因。所以本研究将探讨 LRH 作为高血压中间表型研究的可行性， 计学检验以双侧概率 P<0.05 表示有统计学意义。 并通过在 LRH 和正常肾素高血压（NRH）中检测 5 个 RAS 基因多态 2 结果 性位点——肾素（REN）基因 C-5312T、血管紧张素原（AGT）基因 A-20C 和 M235T、血管紧张素 I 型受体（AGTR1）基因 A1166C、醛 2.1 LRH 组与 NRH 组临床资料比较 LRH 组 SBP（P =0.033）、血 固酮合成酶（CYP11B2）基因 T-344C，探讨 5 个基因多态性与 LRH 钠（P=0.005） 、24 小时尿钠（P=0.02）和左室重量指数（LVMI） （P=0.029） 的易感性关系。 显著高于 NRH 组；HDL （P =0.015）、PRA（P <0.001） 显著低于 NRH 组。 1. 材料和方法 表 1 LRH 组和 NRH 组临床资料比较 中国分子心脏病学杂志 Volume 10 No.4 August 2010 1.1 研究对象 ：所有对象为 2001-2004 年上海交通大学医学院附属 LRH（n=137） NRH（n=245） 瑞金医院高血压科住院病人，均为汉族，无亲缘关系。入选标准 ：① 年龄（岁） 59.25±10.76 57.05±12.36 收 缩 压（SBP）≥140 mmHg 和 / 或 舒 张 压（DBP）≥90 mmHg， 或 正 性别（男 %） 47.44% 66.53% 在接受抗高血压药物治疗 ；②在 30 岁之前或 60 岁以后发病者除外 ； BMI(kg/m ) 26.00±3.68 25.43±3.58 ③临床上除外继发性高血压。④血浆肾素活性（PRA）测定前 2 周服 SBP(mmHg) 155.44±17.39* 151.40±17.81 用能使 PRA 降低的抗高血压药物者（可乐定和 β- 阻滞剂）剔除。研 DBP(mmHg) 96.70±11.05 95.58±11.45 究对象分为 LRH 组 137 人， 平均年龄 59.25±10.76 岁， PRA<0.1ng/ml/h； 24小时血压昼夜节律(有%) 56.00% 55.16% NRH 组 245 人，平均年龄 57.05±12.36 岁，0.1ng/ml/h0.05） 。CYP11B2 基 因 T-344C 多 点符合调节型盐敏感性高血压的临床特征，也说明 LRH 可作为一个较 态 C 等位基因频率在 LRH 组显著高于 NRH（P=0.003），基因型分布 为理想的高血压中间表型。 在 LRH 和 NRH 也存在显著差异（P=0.021） 。其他 4 种基因多态性等 LRH 与水盐代谢关系密切，因此与之相关的基因，特别是 RAS 位基因和基因型分布在 LRH 和 NRH 组间无显著差异（P 均 >0.05） （见 涉 及 的 基 因 如 REN、AGT、AGTR1、CYP11B2 基 因 等 都 能 列 为 与 表 2）。分别采用显性、加性和隐性模型分析，提示显性模型（TT vs LRH 相关的候选基因。本研究检测了 5 个基因多态性与 LRH 的相关 TC+CC）-344C 等位基因的分布在 LRH 组显著高于 NRH 组（OR=1.66, 性，结果提示 CYP11B2 基因 T-344C 多态性与 LRH 的发生相关。 95%CI 1.09-2.53，P=0.018） 。用 Logistic 回归模型校正年龄、性别和 CYP11B2 基因位于 8q22，编码醛固酮合成酶，催化脱氧皮质酮 体重指数（BMI）后，仍显示 C 等位基因携带者 LRH 的易感性增加 逐步生成皮质酮、18 羟皮质酮和醛固酮，后者是调节水盐平衡的重要 （OR=1.93，95%CI 1.23-3.01，P=0.004）。 物质 [2]。研究提示 CYP11B2 基因启动子区 -413 和 -221 之间区域可能 2.3 CYP11B2 基因 T-344C 基因型与表型相关性 比较不同基因型 影响其对 AngII 的反应 [3]。而该基因启动子 -344 处存在 T/C 多态，为 PRA、AngII、血 Ald 和尿 Ald 水平的差异。校正年龄、性别和 BMI 后， 类固醇生成因子 -1 的结合位点，多数研究显示其为一个功能性的多 发现 C 等位基因携带者 PRA 显著低于 TT 基因型（P=0.009）；尿 Ald 态，发现其与血压或醛固酮分泌有关 [4-7]。该多态性与高血压的相关 水平显著低于 TT 基因型（P=0.031），见表 3。 性，在不同人群的关联研究结果不尽相同 [8-10]，甚至在中国的不同地 3 讨论 区、不同种族间存在较大差异 [11-14]。Cheng[15] 等对中国 19 个病例对照 研究共计 7472 例（4259 高血压和 3213 正常对照）进行荟萃分析，发 肾素与高血压关系密切，低肾素与钠潴留和细胞外液容量扩张有 现 CC 基因型和 C 等位基因与高血压发生相关。本研究发现 CYP11B2 关，后者能与高血压的发病机理建立因果关系，因此 LRH 作为原发性 基因 -344C 在 LRH 中的频率显著高于 NRH 组，显性遗传模型提示 C 高血压的一个亚型已获认可 [1]。LRH 与调节型盐敏感性高血压同属于 位点与 LRH 相关，亦与山东汉族 [13] 人群的研究结果相符。Davies 等 一种类型，即增加盐的摄入或盐负荷血压升高，而限盐及缩容使血压 [4] 降低 ；血浆肾素活性降低且对盐的负荷反应迟钝。由于观察盐负荷对 亦观察到 C 等位基因携带者（TC+CC）较 TT 基因型有更低的 PRA 报道 CC 基因型的尿醛固酮分泌水平显著低于 TC 和 TT 型。本研究 Volume 10 No.4 August 2010 见表 1。 中国分子心脏病学杂志 PTT vs TC+CC Research Articles 232 基础研究 和 尿 Ald 水 平。Iwai 等 [16] 对 CYP11B1 和 CYP11B2 基 因 的 13 个 多 型。AngII 刺激缺乏被视为等同于低肾素活性或高盐摄入状态。因此 态性在人群中研究发现，只有 T-344C 这个位点与醛固酮水平相关， TT 基因型在低 PRA 状态呈现更高的醛固酮水平。本研究还检测了其 且 T-344C 与肾素在对醛固酮水平的影响中存在显著的交互作用。功 他 4 个 RAS 基因多态性，但均未发现这些位点等位基因分布在 LRH 能研究提示仅 -344C 能对 AngII 刺激产生应答，在缺乏 AngII 的刺激 和 NRH 间存在显著差异。在今后的研究中应扩大样本量，并选取更 下，-344C 启动子活性显著低于存在 AngII 刺激时，也显著低于 T-344 多候选基因位点进一步验证。 参 考 文 献 aldosterone synthase (CYP11B2) gene polynorphism and classic risk factors on risk of myocardial infarction. 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