实验室生物安全培训.pdf
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实验室生物安全培训 1 目 录 l 一、实验室生物安全概念 l 二、实验室生物安全级别 l 三、实验室生物安全设备 l 四、实验室生物安全管理 l 五、微生物菌（毒）种运输 2 生物安全的概念 l 实验室生物安全概念：避免危险生物因子造成 实验室人员暴露，向实验室外扩散并导致危害 的综合措施。 l 生物安全三个方面： 人类的健康安全； 人类赖以生存的农业生物安全； 与人类生存有关的环境生物安全。 l 生物安全涉及到多个学科和领域：预防医学、 环境保护、植物保护、野生动物保护、生态、 农药、林业等。 3 正确对待生物安全 生物安全？？！！ “无畏” “恐惧” 生物安全防护实验室 4 实验室生物安全事件 l 2003年以来，新加坡、台湾和北京相继 发生实验室人员SARS病毒感染传播事件。 5 实验室生物安全事件 l历史上，立克次体的命名。 6 实验室感染概况 • 80% 是不明原因的感染。 • 20% 感染的原因是明确的。 80% 是由工作人员操作失误引起的； 20% 是由设备故障引起的。 • 导致感染最多的4种实验室事故 溢出和泼洒 针头和注射器 锐器、碎玻璃 动物或动物体外寄生虫的咬伤或抓伤 7 什么是生物危害？ • 生物危害 ：指有害或有潜在危害的生物因子对 人、环境、生态和社会造成的危害或潜在危害。 •. 8 实验室生物危害 •实验室生物危害：指在微生物和生物 医学实验室研究过程中对人、环境、 生态和社会造成的危害和对环境造成 的污染。 9 实验室生物安全的概念 • 实验室生物安全主要考虑: • 通过在实验室设计建造、使用个体防护设施、严 格遵从标准化的工作及操作程序和规程等方面采 取综合措施，确保实验室工作人员不受实验对象 的感染，确保周围环境不受实验对象的污染。 10 遵守法律法规： ü 国家法律法规： 中华人民共和国传染病防治法（2004 ) ü 国务院424号令： 《病原微生物实验室生物安全管理条例》 ü 《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2004） ü 卫生部文件： 《人间传染的病原微生物名录》： (2006.01.11) ü 《危险品航空安全运输细则》 11 二、实验室生物安全级别 12 感染性微生物的危险度等级分类 13 BSL-1 BSL-2 BSL-3 BSL-4 BSC：生物安全柜；GMT：微生物学操作技术规范。 14 生物安全水平分级 • 根据生物因子危害程度和采取的防护措施，将生物安全防护水平 （biosafety level，BSL）分为4级（BSL-1、 B S L - 2 BSL-2、BSL-3、 BSL-4表示）；动物实验室以ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3、ABSL-4 表示。 • 一级实验室一般适用于对健康成年人无致病作用的微生物； • 二级适用于对人和环境有中等潜在危害的微生物； • 三级适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病 微生物或其毒素； • 四级适用于对人体具有高度的危险性，通过汽溶胶途径传播或传播途径 不明、目前尚无有效疫苗或治疗方法的致病微生物或其毒素 15 一级生物安全防护实验室 BSL-1 实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适 用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如 用于教学的普通微生物实验室等。 • E.coli 16 BSL-1实验室 1) 普通建筑物，防节肢动物和啮齿动物。 2) 每个实验室设洗手池，宜靠近出口处。 3) 实验室门口设挂衣装置，个人便装与工作服分开。 4) 实验室各表面平整、易清洁、不渗水、耐腐蚀。 5) 实验台面防水，耐腐蚀、耐热。 6) 橱柜和实验台牢固，保持一定距离以便于清洁。 7) 如有可开启的窗户，应设置纱窗。 8) 保证工作照明，避免不必要的反光和强光。 9) 有适当的消毒设备。 17 典型的一级生物安全水平实验室 不需要特殊的一级和二级 屏障、除需要洗手池外， 依靠标准的微生物操作即 可获得基本的防护水平。 18 二级生物安全防护实验室 BSL-2 实验室结构和设施、安全操作规程、安全设 备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微 生物。 19 BSL-2实验室 1) 满足BSL-1的要求。 2) 实验室门带锁并可自动关闭，门应有可视窗。 3) 应有足够的存储空间摆放物品以方便使用。在实 验室工作区域外还应当有供长期使用的存储空间。 4) 在实验室内使用专门的工作服，戴乳胶手套。 5) 在实验室工作区域外有存放个人衣物的条件。 20 BSL-2实验室 6) 建筑内应配备 高压蒸汽灭菌器 。 7) 在实验室内配备生物安全柜。 8) 设洗眼设施，必要时应有应急喷淋装置。 9) 通风，如使用窗户自然通风应有防虫纱窗。 10)有可靠的电力和应急照明，必要时设备用 电源。 11)实验室出口有在黑暗中可明确辨认的标识。 21 BSL-2实验室 在处理危险度2 级或更高危险度 级别的微生物时， 在实验室门上应 标有国际通用的 生物危害警告标 志。 22 典型的二级生物 安全水平实验室 23 三级生物安全防护实验室BSL-3 实验室结构和设施、安全操作规程、安全 设备适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重 的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通 常已有预防传染的疫苗。 24 BSL-3实验室 • 在建筑物中自成隔离区或为独立建筑物。 • 由清洁区、半污染区和污染区组成。污染区和半 污染区之间应设缓冲间。 • 污染区与半污染区之间、半污染区和清洁区之间 应设置传递窗。 • 我国的第一个P3实验室建于1987年，当时主要 用于艾滋病研究。 25 某 BSL3 实验室设计图 26 BSL-3实验室 l 围护结构 l 实验室内表面应光滑、耐腐蚀、防水；所有缝隙应 可靠密封，防震、防火。 l 围护结构外围墙体应有适当的抗震和防火能力。 l 天花板、地板、墙间交角均为 形且可靠密封。 l 不应有可开窗户；内设窗户应防破碎、防漏气。 l 出入口处应采用防止节肢动物和啮齿动物的设计。 27 BSL-3实验室 • 送排风系统 • 独立的送排风系统以控制气流方向和压力梯度。 • 送风口和排风口的布置对面分布，上送下排。 • 送排风系统应为直排式，不得采用回风系统。 • 应安装风机和生物安全柜启动自动联锁装置。 28 BSL-3实验室 • 环境参数 • 相对室外大气压，污染区为-40Pa，并与生物安 全柜等装置内气压保持安全合理压差。 29 BSL-3实验室 • 其他 • 实验室所需压力设备不应影响室内负压梯度。 • 实验室应设置通讯系统。 • 实验记录等资料应通过计算机等发送至实验室外。 • 清洁区设置淋浴装置。 30 典型的三级生物 安全水平实验室 31 四级生物安全防护实验室BSL-4 实验室结构和设施、安全操作规程、安全设 备适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶 胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的 疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素。 32 BSL-4实验室 • P4实验室是指生物安全四级实验室，专门 用于开展烈性传染病的研究，是全球生物安 全最高级别的实验室，目前国内尚无一家。 • P4实验室的安全措施比P3实验室更严格， 研究人员入内不仅要穿全封闭的防护服，还 要携带氧气瓶。 • 中国军事医学科学院在建准P4实验室。 33 与外界沟通 34 动物实验室的生物安全 • 参照BSL1-4实验室的要求，还应考虑动物实验过 程产生的潜在生物危害的防护。 • 应根据动物的种类、身体大小、生活习性、实验 目的等选择专用于动物的生物安全柜、动物饲养 设施、动物实验设施、消毒设施和清洗设施等。 35 三、生物安全设备 •1.超净台 •2.通风橱 •3.生物安全柜 36 超净台 正压柜 气流从顶部或底部经过 过滤器后从操作区正面 流向工作台面，被样品 污染的气流排出柜外， 没有循环气流。 超净台保护样品不受污 染，适用于普通实验室 或1级生物安全水平中对 人员和环境无保护要求 的实验。 37 通风橱 • 是实验室，特别是化学实验室 的一种大型设备。用途是减少 实验者和有害气体的接触。 • 通风橱是保护人员防止有毒 化学烟气危害的一级屏障。它 可以作为作为重要的安全后援 设备，像在化学实验过程失败， 化学烟雾、尘埃和有毒气体产 生时有效排出有害气体，保护 工作人员和实验室环境。 38 生物安全柜 Biological Safety Cabinets • 生物安全柜的要求: • 颗粒经HEPA过滤去除 • 气流为层流 • 气流有方向 HEPA (High efficiency particulate air Filter)，高效空气过滤器，达 到HEPA标准的过滤网，对于0.1um和0.3um的有效率达到99.998%， HEPA网的特点是空气可以通过，但细小的微粒却无法通过。 39 Class I 生物安全柜 • 可开启前窗在负压下操 作 • 表面风速在0.36m/s， 排出的气体经HEPA 过 滤 • 保护操作人员和环境 • 适用于要求生物安全等 级1、2、3的工作 • 适用于样品不需保护的 实验工作 40 Class II 生物安全柜 41 l 所有的二级生物安全柜同一级生物安全柜 一样，能够保护操作人员和实验室环境免 受危害。 l 二级安全柜也能够保护产品样本在微生物 操作过程中免受污染。 l 二级生物安全柜可以在一、二、三级生物 安全水平的生物因子操作中使用。 42 Class II 生物安全柜的分类 43 Class II生物安全柜空气流向 44 生物安全柜放置 • 摆放要求 稳固的平台或支架 两侧、后面和上端留 30cm 工作台 设备 候选位置 • 五个远离点（气流） 门 风扇 空调 开着的窗户 人员活动频繁的区域 Air Register 首选位置 设备 45 反面 教材 46 生物安全柜的使用 • 准备： ü在开始工作前应考虑实验中的操作步骤和所需设备， 充分做好准备工作。 ü用消毒液彻底洗净手和手臂、穿长袖工作服和手套。 ü准备好消毒剂和处理遗撒事件的物品。 ü尽量减少房间内的走动，保证正常气流。 ü前窗开至适当高度，打开安全柜的灯和风机。 ü让生物安全柜工作区排气几分钟之后再开始工作 47 生物安全柜的使用 • 操作： ü消毒桌面（70% 乙醇， 也可以用1 :100 漂白水， 但要注意使用完毕后必须要用无菌水擦走，使用紫外 线作为表面消毒的效果不一定能完全无菌） ü 安全柜内只放本次实验所需的物品。所有物品离前窗至少15cm，即在隔栅之后，所有污染性的操 作尽量远离工作区域的后部。 ü 大物体之间要保持一定距离。 48 生物安全柜的使用 • 操作： ü干净和被污染的物品分开放置；被污染的物品尽量 不要进入干净区域，应放置在工作区域的后部。 ü操作时物品和手臂不要频繁穿过前窗。 ü操作完毕后，将物品表面用适当的消毒液擦拭后移 出，用消毒液擦拭安全柜内面。 49 生物安全柜的使用 操作者在移动双臂进出安全柜时，应该垂直地缓慢进 出前面的开口。 Ⅱ级生物安全柜 前面的进气格栅 不能被阻挡。 放入柜内的物品 应采用70%酒精来 清除表面污染。 50 生物安全柜的使用 所有物品应尽可能地放在工作台后部靠近工作台 后缘的位置，并使其在操作中不会阻挡后部格栅。 可产生气溶胶的设备（例如混匀器、离心机等） 应靠近安全柜的后部放置。 废弃物袋、盛放废弃吸管的盘子以及吸滤瓶等体 积较大的物品，应该放在安全柜内的某一侧。 51 生物安全柜的使用 52 生物安全柜内接种针的灭菌 红外电热接种环灭菌器 53 生物安全柜的使用 • 在每次使用前后，要清除生物安全柜内表面的污染。 工作台面和内壁要用消毒剂进行擦拭，所用的消毒 剂要能够杀死安全柜里任何微生物。 • 在使用生物安全柜时应穿着个体防护服。在进行一 级和二级生物安全水平的操作时，可穿着普通实验 服。 54 生物安全装置异同 高效空 气过滤 工作人 员安全 无涡流 单向流 空气 实验对 象不受 污染 手套箱 式操作 口 通风橱 无 是 是 否 否 I级 有 是 否 否 否 II级 有 是 是 是 否 III级 有 是 是 是 是 55 对各级生物安全水平实验室的要求 生物安全 柜 生物安全级别 一级 二级 三级 四级 Ⅰ级 不需 要 随意 需要 不需要 Ⅱ级 不需 要 最好 有 需要 需要，在防护服实验 室中使用 Ⅲ级 不需 要 不需 要 最好 有 需要，在安全柜室使 用 56 个人防护装备 实验室防护服 面部及身体保护 手套 鞋 呼吸防护 57 个体防护装备 装备 避免的危害 安全性特征 实验服、隔离衣、连体衣 塑料围裙 鞋袜 护目镜 安全眼镜 面罩 污染衣服 · 背面开口 · 罩在日常服装外 污染衣服 · 防水 碰撞和喷溅 · 不露脚趾 碰撞和喷溅 · 防碰撞镜片（必须有视 力校正或外戴视力校 正眼镜） · 侧面有护罩 碰撞 · 防碰撞镜片（必须有视 力校正） · 侧面有护罩 碰撞和喷溅 · 罩住整个面部 · 发生意外时易于取下 58 个体防护装备 装备 避免的危害 防毒面具 吸入气溶胶 手套 安全性特征 · 在设计上包括一次性使用的、整 个面部或一半面部空气净化 的、整个面部或加罩的动力空 气净化（powered air purif ying，PAPR）的以及供 气的防毒面具 直接接触微生物 · 得到微生物学认可的一次性乳 划破 胶、乙烯树脂或聚腈类材料 · 保护手 · 网孔结构 59 四、实验室生物安全管理 实验室及其人员生物安全管理，按 于2004年11月起施行。 60 管理制度 实验室内设置和准入 • 在主实验室内应合理设置清洁区、半污染区 和污染区。 • 非实验有关人员和物品不得进入实验室。 • 实验室工作人员、外来合作者、进修和学习 人员在进入实验室及其岗位之前必须经过实 验室主任的批准。 61 实验室工作人员资格和培训 • 实验室的工作人员必须是受过专业教育的技术人员。 在独立工作前须在中高级实验技术人员指导下进行 上岗培训，达到合格标准，方可开始工作 • 实验室的工作人员必须被告知实验室工作的潜在危 险并接受实验室安全教育，自愿从事实验室工作 • 实验室的工作人员必须遵守实验室的所有制度、规 定和操作规程 62 实验室特殊管理 • 对可能的危险因素，制定保证安全的工作程序。 • 事前进行有效的培训和模拟训练。 • 对于意外事故要能够提供包括紧急救助或专业 性保健治疗的措施，足以应付紧急情况。 • 实验室事故处理及上报。 63 实验室生物安全管理制度 • 实验室内务管理制度 • 尖锐器具安全使用制度 • 实验室消毒防护制度 • 标本采集运输制度 • 废弃物处理制度 • 工作人员防护制度 • 差错事故处理制度 64 什么是医疗废物？ • 医疗废物：医疗卫生机构在医疗、预防、保健以及其他相关活动中产生的具有直接或者间接感染性、 毒性以及其他危害性的废物。 65 医疗废物分类 • 感染性废物 • 病理性废物 • 损伤性废物 • 药物性废物 • 化学性废物 66 处置要点 • 医疗废物集中处置 • 包装物要防渗漏、防锐器穿透，明显标识和警示说明 • 医疗废物储存设备定期消毒 • 医疗废物制病原体的培养基、标本和菌种、毒种保存液等高危险废物，在交医疗废物集中处置前应就 地消毒 67 生物安全事故应急预案 差错事故、感染事故 1、一般差错：生物安全柜内洒溢，没有严重后果。 实验室内部处理，处理后报告实验室负责人。 2、重大差错：安全柜内大量感染性材料洒溢，实验室 内和工作服小量洒溢，没有造成严重的后果。 实验室所在单位处理。 68 实验室感染事故分级 •一般(性)实验室感染 •严重实验室感染 •重大实验室感染 69 一般实验室感染事故 一般性实验室感染是指实验人员1—5人在实验 室中感染了三、四类病原微生物，引起轻度的临 床症状，所致感染对实验人员身体不产生明显损 害的感染； 感染性物质洒溢在实验室清洁区、皮肤、粘膜、 消毒不彻底，发生气溶胶外溢。 非高致病性病原微生物实验室感染（第三、四 类病原微生物），没有造成严重后果。 及时向所在单位领导及上级主管部门报告。 70 严重实验室感染事故 严重实验室感染是实验室人员在实验室中，1人 感染了二类病原微生物，具有明显的临床表现的， 但尚未造成周围人群和环境危害的实验室感染， 或发生一般性实验室感染5人以上的。 发生高致病性病原微生物相关感染，但没有发 生死亡和病例扩散（包括不能排除实验室感染情 况的）。 向省内省级卫生行政部门报告。 71 重大实验室感染事故 重大的实验室感染是指实验室人员发生1人 及以上在实验室中感染了一类病原微生物， 且具有明显的临床表现，波及和危害到周围 人群，甚至危害到社会人群的安全，或二类 病原微生物感染2人以上。 发生高致病性病原微生物相关感染并造成 或可能造成死亡和病例扩散，高致病性病原 微生物丢失、被盗。 报告省级卫生行政部门，并报告卫生部。 72 实验室感染事件的报告 责任报告人：各科实验室工作人员，及其 他实验人员和管理人员。物安全实验室工 作人员及有关人员 报告内容：时间、地点、检测内容、感染 物质的浓度、计量、暴露途径、扩散方式、 污染范围等。 感染发病的应报告：发病时间、症状、病 程、体征、化验结果、治疗措施等。 报告时限：参照突发公共卫生事件和法定 传染病报告时限。 73 l 生物安全 意识至关重要! 74 •五、微生物菌（毒）种或样本运输 菌株运输 75 中华人民共和国卫生部令 第45号 《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种 或样本运输管理规定》已于2005年11月24日经 卫生部部务会议讨论通过，现予以发布，自2006 年2月1日起施行 部长 高强 二○○五年十二月二十八日 76 可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本 ▲第一类、第二类病原微生物菌（毒）种或 样本。 ▲第三类病原微生物运输包装分类为A类的病 原微生物菌（毒）种或样本， ▲疑似高致病性病原微生物菌（毒）种或样 本 77 人间传染的病原微生物名录 78 l省内运输 l省间运输 79 省（自治区、直辖市）内运输 省内运输 申请 批准 省级卫生行政部门 80 省（自治区、直辖市）间运输 初审 省级卫生 行政部门 批准 省间运输 申请 卫生部 申请 81 申请材料 • 1.可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒） 种或样本运输申请表； • 2.申请单位法人资格证明材料（复印件） • 3.接收单位法人资格证明材料（复印件） • 4.接收单位同意接收证明 • 5.接收单位实验室资质证明 82 申请单位须提供材料 83 接收单位须提供材料 84 85 准 运 证 书 86 航空运输 危险品运输国内机场操作限制 87 包装 三层包装体系 ★防水的主容器 ★防水的辅助包装 ★强度满足其容积、质 量及使用要求的刚性 外包装 88 UN2814类冷藏包装 89 90 UN2814类不冷藏包装 91 UN3373类冷藏包装 92 UN3373类不冷藏包装 93 航空运输 法律性文件： ≪危险物品航空安全运输技术细则≫ （TI),由 国际民航组织出版发行的芝加哥公约附件18至 下关于危险物品航空运输的法律性文件 中国民用航空危险品运输管理规定（民航总局 令121号 CCAR-276部），称为276部 操作性文件： ≪危险物品规则≫ （Dangerous goods regulations，DGR),在TI的基础上以国际航空 运输协会的附加要求和有关文件的细节作为补充， 是操作性文件。执行DGR如同执行TI. 94 CCAR276部是依据《中华人民共和国民用航空法》和《国务 院对确需保留的行政审批项目设定行政许可的决定》制定的 操作性文件 95 法律责任 托运方（托运人及其代理人） 1.判断 （识别）identification 2.分类 classification 3.包装 pack 4.标记 mark 5.标签 label 6. 文件（填制托运人申报单） documentation 以上应依照DGR和相关国家的法规。 96 承运方（运营人及其代理人） 1. 收运（完成check list） 2. 仓储 3. 装载 4. 货物破损的检查 5. 信息提供（对机长、雇员、旅客、 收运处） 6. 报告 7. 文件保留（申报单／check list／机 长通知单） 8. 培训 97 危险物品的分类 • 第1类 • 第2类 • 第3类 • 第4类 • 第5类 • 第6类 • 第7类 • 第8类 • 第9类 爆炸品 1.1 ~ 1.6 项 气体 2.1 2.2 2.3 项 易燃液体 易燃固体 4.1 4.2 4.3 项 氧化剂和有机过氧化物 5.1 5.2项 毒害品和感染性物质 6.1 6.2项 放射性物品 腐蚀品 杂项危险品 98 包装 99 标记 • 1、UN或ID编号 • 2、运输专用名称（感染性物质，可感染人类） • 3、托运人名称和地址 • 4、收货人名称和地址 • 5、负责人24小时紧急电话 • 6、净数量 • 7、如使用干冰做制冷剂，应标出干冰、UN1845以及干冰的 净重 100 101 标记实例 102 UN规格包装标记 l 这种标记说明此种设计类型的包装已经 成功地通过试验，其标记和包装制造商有 关而与使用无关。 感染性物质应用的UN规格包装标记： 103 UN规格包装标记实例 104 标签 105 申报单 106 UN 2814 • 感染性物质，可感染人的 • （结核分枝杆菌） • IInfectious substances • affecting humans • (Mycobacterium ， tuberculosis) 6.2 • 1铝箱×6g 602 107 需向航空公司出具材料 托运UN2814感染性物质应提交： 1、托运人危险物品申报单 2、准运证书 3、包装检测报告 4、托运人危险品运输资格证 5、国内货物托运书 6、身份证 108 109 1、陆地运输时需要有不少于2名接受过培训的专业人员 运送菌株（省内各单位之间、单位到机场） 2、申请单位应当对护送人员进行相关的生物安全知识培 训 3、可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种运输管 理培训班——疾病控制机构、航空公司、公安部门 4、在护送过程中采取相应的防护措施 5、在运输结束后，申请单位应当将运输情况向原批准部 门书面报告。 110 谢谢! 111